報告書番号

V10018

タイトル（和文）

環境モニタリングを目的とした抗体の開発（６）－低分子化合物の抗体取得を目指したファージライブラリーの作製－

タイトル（英文）

Monoclonal antibodies for environmental contaminants monitoring [6] - Phage display of antibody for small molecules -

概要 （図表や脚注は「報告書全文」に掲載しております）

環境中の物質の計測手段として、価格、簡便性などの利点を持つバイオセンサーの実用化が進んでいる。抗体は計測対象の物質を検知する素子として多くのバイオセンサーで利用されている。従来の抗体のほとんどは動物を利用して作製されているが、生体内で有害な働きをする物質に対する抗体を動物で作製することは困難である。多くの環境汚染物質は毒性を持つ物質であるため、微生物であるファージを利用して多様な抗体を含むファージライブラリー（図1）を作製し、目的の抗体を選別する方法が有効である。そこで、本研究では種々の重金属化合物に結合する抗体を高確率に含むファージライブラリーを作製を目的として、ファージに組み込むための抗Cr-EDTA抗体のを単離し、抗体機能を持つファージ（ファージ抗体）の構築に利用した。得られたファージ抗体のCr-EDTAに対する結合能が、マウスの細胞から得られた抗体とほぼ同等の機能を持つことが確認され、本遺伝子発現系がファージライブラリー作製に適した発現系であることがわかった。また、多様なファージ抗体を作製するために、抗Cr-EDTA抗体を基にして抗原結合部位の構造をランダムに改変した抗体遺伝子を合成した。これらの遺伝子を前述の抗体発現系に導入したところ、抗原結合部位に10の8乗以上の多様性を持つファージライブラリーを作製することができた。

概要 （英文）

Antibodies are an essential device detecting target molecule in many biosensors, which are considered an increasingly important tool for measurement of environmental pollutants because of its characteristics, including being easy and relatively inexpensive to use. Phage display is a powerful method for selecting and engineering antibodies binding specific targets. However antibodies for small molecules produced by phage display have not been applied commercial biosensor.
In this report, a phage library was constructed using genes of anti-Cr-EDTA antibody (RD3G4) to build a scaffold that supports antigen binding site. We found that the scaffold had highly homogeneous amino acid sequence with some antibodies against small molecules. Therefore we believe that the scaffold is promising to make antibodies binding small molecules. We made phage display system that displayed RD3G4 on phage and it could bind to Cr-EDTA as well as RD3G4 produced by hybridoma. The library consisted of more than 1E8 unique sequences for antigen binding site. We will sort antibodies against environmental contaminant from the library.

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