報告書番号

V05017

タイトル（和文）

ＤＮＡ情報を利用した新しい野生動物調査法の開発 -－タヌキの個体識別と未知生物試料からの種同定－-

タイトル（英文）

Development of new wildlife research techniques using DNA analysis- DNA typing of raccoon dog and species identification of unknown animal samples -

概要 （図表や脚注は「報告書全文」に掲載しております）

タヌキの生息数の推定や社会構造の解析に適用することを目的に、個体識別および性判定用のDNAマーカーの開発を行った。DOP－PCR、磁気ビーズによる濃縮およびPCRスクリーニングを組み合わせた方法により、15種類のGATA反復のマイクロサテライトDNAを効率よく単離できた。このうちの8種類の利用でタヌキ20個体がすべて識別可能であった。また、性染色体上のZFX/ZFY遺伝子を単離し、その塩基配列の違いを利用した雌雄判別マーカーを開発した。これらのDNAマーカーを用い、野外で採取したタヌキの糞からDNA解析を試みた。冬季に採取した糞および排泄翌日の新鮮な糞からは良好な解析結果が得られたことから、保存状態が良い糞からは個体識別や性判定が可能であることが示唆された。また、他の動物の糞や骨などの種判別が困難な生物試料から、シトクロームb遺伝子を用いて解析したところ、正確に種を同定することが可能であり、そのような生物試料からのDNAによる種同定は有効であることが確かめられた。

概要 （英文）

The Environmental Impact Assessment Law requires prediction and assessment of the impact of business activities on an ecosystem. But, it is difficult to get the data for quantitative prediction by usual methods of the assessment research. To highly accurately and efficiently implement research and evaluation of wildlife and the ecosystem in Ecosystem impact assessment, we are studying applicability of the research method using DNA analysis. Raccoon dog (Nyctereutes procyonoides) is widely distributed in Japan, and inhabits mainly country-side forest. In this study, we developed raccoon dog DNA marker for new research method using DNA analysis. We cloned fifteen GATA repeat microsatellite loci from raccoon dog genome using DOP-PCR, a biotin-capture technique, and PCR screening. Using eight of the loci, twenty individuals could be distinguished each other. We also isolated partial coding region of Zinc finger protein genes located on sex chromosome, and developed the sex determination marker based on polymorphism between X and Y chromosomal genes. DNA typing was tried from raccoon dog feces sampled in the field with these DNA markers. We could amplify the DNA fragments and do an accurate DNA typing from fresh fecal samples or feces collected in winter. It was suggested that the individual animals and sex were able to identify from well preserved feces. The research method using fecal DNA analysis will be useful for population estimation and behavioral research of raccoon dog.

報告者

キーワード