報告書番号

U99053

タイトル（和文）

ダイズフェリチンの細胞内輸送を担うトランジットペプチド領域の解析

タイトル（英文）

Evaluation of the transit peptide-less soybean ferritin in tobacco transformant

概要 （図表や脚注は「報告書全文」に掲載しております）

ダイズフェリチンのトランジットぺプチド(TP)部分の機能を明らかにするために、TPと緑色蛍光タンパク質(GFP)の融合遺伝子や、TPを除いたダイズフェリチン遺伝子をタバコに導入した。その結果、ダイズフェリチンTPによって種の異なるタバコにおいても葉緑体が認識され、フェリチンの代わりにGFPが葉緑体に輸送された。また、TPを持たないフェリチンは葉緑体外（細胞質）に存在するようになった。さらに、TPを持つものと比べてmRNA*1への転写量がほぼ同じであるにも関わらず、タンパク質の存在量は明らかに少なかった。以上の結果から、特定したＴＰ部分がダイズフェリチンの葉緑体への輸送を制御する機能をもち、フェリチンの安定化に役立っていることが明らかとなった。

概要 （英文）

To certify and to be visible the role of transit peptide (TP) of soybean ferritin, a chimeric gene fusion of the ferritin TP and green fluorescent gene (GFP) is transferred into tobacco. Results showed that the TP/GFP fusion protein could be clearly detected in chloroplast in the transformants. Subsequently, a cDNA of iron storage protein ferritin, that isolated from soybean cotyledon with/without the native transit peptide addressing to chloroplast (+TP/-TP), was transferred into tobacco plants via Agrobacterium. The constitutive expression of both types of the ferritin cDNA was regulated under the control of CaMV 35S promoter. The Northern blotting analysis demonstrated that both types of the cDNA were similarly expressed in leaves irrespective of the growing stages of the transformants. The Western blotting analysis indicates that the ferritin molecule with TP could correctly address to tobacco chloroplast, but that without TP was still being in cytosol after translation at detectable levels. It was notable that the quantity of accumulation of the molecule was clearly smaller in case of the constitution without TP than that with TP. The proper assemble of the +TP ferritin subunit was demonstrated by the immunological detection with native-PAGE, but not of the -TP ferritin subunit that may be caused from very few amount. In conclusion, the ferritin TP contain the role of translocation the subunit to chloroplast and stabilize the activity.

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